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蛋白共提取試劑盒的使用操作步驟
發(fā)布日期：
2017-02-22
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蛋白共提取試劑盒能夠簡(jiǎn)單、快速的提取來(lái)源于哺乳動(dòng)物細(xì)胞的細(xì)胞核和細(xì)胞漿蛋白，所提取蛋白保持生物學(xué)活性。抽提獲得的核蛋白及漿蛋白純度高，有效避免核/漿蛋白的交叉污染，可以用于Western、Gel Shift、報(bào)告基因檢測(cè)以及酶活力測(cè)定等后續(xù)操作。
1．請(qǐng)?jiān)诘鞍壮樘崆叭〕龀樘嵩噭〢、B和C進(jìn)行預(yù)冷
2．收集細(xì)胞，計(jì)數(shù)。離心去上清。
3．1×107細(xì)胞中加入0.5ml細(xì)胞核抽提試劑A，渦旋5秒以充分混勻，冰上孵育10分鐘。
注意：各種細(xì)胞的特性不同，需要根據(jù)不同細(xì)胞的特性調(diào)整細(xì)胞核抽提試劑A的用量，如果蛋白濃度小，按比例減少細(xì)胞核抽提試劑A及后續(xù)細(xì)胞核抽提試劑B、C的用量。
4．4℃ 3000 rpm離心 10min，吸棄上清。
5．加入374μL細(xì)胞核抽提試劑B，再加入26μL細(xì)胞核抽提試劑C
6. 將步驟5中溶液加入玻璃勻漿管中，用玻璃勻漿管冰上反復(fù)勻漿20次，冰上孵育30min。
7．4℃ 12,000 rpm離心20分鐘，收集上清（盡量收集干凈上清液）至新的離心管中，-20℃保存（此提取液為胞核蛋白）。
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