　　實時熒光定量PCR是一種在擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環(huán)后產(chǎn)物的總量，通過內(nèi)參或者外參法對待測樣品中的特定基因序列進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR服務包括SYBRGreen熒光定量和TaqMan探針PCR，提供檢驗設計,RNA提取、標準品制備,數(shù)據(jù)分析和詳盡的實驗報告。所謂實時熒光定量PCR技術，是指在PCR反應體系中加入熒光基團，利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進程，后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。

　　1. Ct值的定義

　　在熒光定量PCR技術中，有一個很重要的概念 -- Ct值。C代表Cycle，t代表threshold，Ct值的含義是：每個反應管內(nèi)的熒光信號到達設定的域值時所經(jīng)歷的循環(huán)數(shù)。

　　2. 熒光域值（threshold）的設定

　　PCR反應的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號，熒光域值的缺省設置是3-15個循環(huán)的熒光信號的標準偏差的10倍，即：threshold = 10 ′ SDcycle 3-15

　　3. Ct值與起始模板的關系

　　研究表明，每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關系，起始拷貝數(shù)越多，Ct值越小。利用已知起始拷貝數(shù)的標準品可作出標準曲線，其中橫坐標代表起始拷貝數(shù)的對數(shù)，縱坐標代Ct值。因此，只要獲得未知樣品的Ct值，即可從標準曲線上計算出該樣品的起始拷貝數(shù)。

　　實時熒光定量PCR技術有效地解決了傳統(tǒng)定量只能終點檢測的局限，實現(xiàn)了每一輪循環(huán)均檢測一次熒光信號的強度，并記錄在電腦軟件之中，通過對每個樣品Ct值的計算，根據(jù)標準曲線獲得定量結果。

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實時熒光定量PCR服務在實際應用中的定量分析法